Pribolab - EKT-110-48TPriboFast®β-鹅膏毒肽(β-AMA)ELISA检测试剂盒-43170

【概要】

我国毒蘑菇种类繁多，已记载有 435 种。近年来，国内频发因误食毒蘑菇的中毒事件，其中 90%以上的死亡事件是由鹅膏

菌属（Amanita）的蘑菇引起的，鹅膏菌的致死性毒素是鹅膏肽类毒素，根据其氨基酸组成和结构可分为鹅膏毒肽（Amatoxins）、

鬼笔环肽（Phallotoxins）、毒伞肽（Virotoxins）三类，均属于大环多肽。目前已分离鉴定的天然鹅膏菌毒素有22 种，其中

鹅膏毒肽有 9 种，属于双环八肽，α-鹅膏毒肽和β-鹅膏毒肽是导致死亡的主要毒素。本试剂盒是一款高灵敏度的快检产品，可

以快速定量检测尿液、血清、蘑菇等样本中鹅膏毒素的含量。

【实验原理】

本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔上预包被鹅膏毒素 抗原，样本中鹅膏毒素 和此抗原竞争鹅膏毒素酶标抗

体，经显色液显色，样本吸光值与其含有的鹅膏毒素 的量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本

中鹅膏毒素的含量。

【交叉反应率】

β-鹅膏毒素…………………………………………………………………………………100 %

α-鹅膏毒素…………………………………………………………………………………30 %

γ-鹅膏毒素…………………………………………………………………………………20 %

【产品参数】

检出限: 尿液 0.4 ppb；血清 0.5ppb；鲜蘑菇 1ppb；干蘑菇 10 ppb。

【试剂配制】

1. 浓缩洗涤液(10X)：用去离子水将浓缩洗涤液（10X）按 1：9 体积比进行稀释（1 份浓缩洗涤液+9 份去离子水）。

2. 浓缩样品稀释液 B(10X)：用去离子水将浓缩样品稀释液 B（10X）按 1：9 体积比进行稀释（1 份浓缩品稀释液 B+9 份去离

子水）。

3.

40%甲醇溶液：用去离子水将甲醇按 2：3 体积比进行稀释（2 份甲醇+3 份去离子水）。

【测定前须知】

1.

使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25 ℃）。

2.

使用之后立即将所有试剂放回 2~8 ℃。

3.

ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。

4.

在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

【样本前处理步骤】

尿液样本前处理（样本稀释倍数：4）

1. 样本 4 倍稀释：在 1.5mL 离心管中，分别加入 600 µL 的样品稀释液 A，200 µL 的尿液，充分混匀。

2. 混匀液即为待测液。

血清样本前处理（样本稀释倍数：5）

1. 样本 5 倍稀释：在 1.5mL 离心管中，分别加入 400 µL 的样品稀释液 A，100 µL 的血清，充分混匀。

2. 混匀液即为待测液。

鲜蘑菇样本前处理（样本稀释倍数：10）

1. 将样品进行粉碎，称取 1.0 g 样品加入 10mL 样品稀释液 B，振荡混合 5 min。

2. 样品 5000 rpm 离心 10 min。如果上清液没有完全和沉淀分离，可适当提高转速或离心时间，必要时过滤悬浮液。

3. 上清液即为待测液。

干蘑菇样本前处理（样本稀释倍数：100）

1. 将样品进行粉碎，称取 0.5 g 样品加入 5mL 40%甲醇/水溶液，振荡混合 5 min。

2. 样品 5000 rpm 离心 10 min。如果上清液没有完全和沉淀分离，可适当提高转速或离心时间，必要时过滤悬浮液。

3. 上清液用样品稀释液 B 10 倍稀释，混匀，即为待测液。

如果样品的检测结果超出了试剂盒测定范围，需要用样品稀释液 B 对样品溶液进行进一步稀释。额外的稀释倍数在浓度计算

时必须考虑在内。

【检测步骤】

1、按上述步骤制备相应样品待测液。

2、取出适量酶标板孔。加入标准品溶液或样品待测液 50 µL/孔，每个样品做 2 孔平行。

3、加酶标物 50 µL/孔，混匀，加盖板膜，室温下反应 20 min。

4、按下述步骤洗涤三至四次：去盖板膜，甩干孔液，加洗涤工作液 300 µL /孔，充分洗涤 30 s；弃去孔液，重复洗涤三至

四次，最后一次用吸水纸拍干。洗涤过程至关重要，洗涤不充分将导致精确度差，吸光值升高。

5、加显色液 100 µL/孔，加盖板膜，置于室温避光环境中（如抽屉、橱柜中，显色液对光敏感）反应 10 min。

6、加终止液 100 µL/孔，终止反应，颜色从蓝色变成黄色。

7、轻轻振荡，充分混匀，于酶标仪 450 nm（参考波长 630 nm）下读取吸光度值（颜色可稳定 10 min）。

【结果分析】

按上述步骤处理样品，计算时需要乘以稀释倍数。如样品毒素含量过高，需要进一步稀释时，要重新计算稀释倍数。

本公司可提供专业的数据处理软件，如需安装使用方法指导及其他技术问题，欢迎致电：400-688-5349。

【注意事项】

请严格遵守实验室规范操作，以确保实验结果的可靠性。

1.

实验开始之前要将所有的试剂恢复至室温（20~25 ℃）。

2.

所有的试剂使用前都要轻轻颠倒摇匀或者涡旋混匀，避免产生泡沫。

3.

一旦实验开始，所有后续步骤应该在建议时间内连续完成。

4.

所有试剂用完后立刻盖上盖，不同试剂之间不能交换瓶盖。

5.

每个样品都要单独使用一个一次性枪头，避免交叉污染。

6.

样品和标准品要同时进行操作，保证实验条件的一致性。

7.

不同批次的试剂不能混用。

8.

不要使用过期的试剂盒。

9.

实验室设备和仪器使用前要校准精确度和准确度（微量移液枪、酶标仪等）。

10. 试剂盒内标准品仅用于标准曲线配置，不用作其他用途。

【贮藏条件及保存期】

贮藏条件：保存试剂盒于 2～8 ℃。

保存期：见外包装。

【技术与售后请联系】

青岛普瑞邦生物工程有限公司

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