Pribolab - IAC-020-3/PriboFast®玉米赤霉烯酮免疫亲和柱-3ML-1T-90166

一、产品用途：

本产品可选择性吸附样品提取液中的玉米赤霉烯酮，实现对目标物的特异性纯化。经过柱纯化后， 样品液的杂质明显减少，可用于不同分析方法的测定。

二、概述：

玉米赤霉烯酮（Zearaleaone）又称 F-2 毒素，是禾谷镰刀菌等产生的代谢产物，具有雌激素样作用，具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。

三、反应原理：

本产品测定的基础是抗原抗体反应。玉米赤霉烯酮单克隆抗体固定于柱内凝胶上，样品中的玉米赤霉烯酮经过提取、过滤、稀释，然后缓慢通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在柱内玉米赤霉烯酮与抗体特异性结合，之后洗涤免疫亲和柱，除去未结合的其他物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮， 注入到分析仪器中进行检测。

四、产品组成：

包括玉米赤霉烯酮免疫亲和柱、产品说明书及 COA。

注：复杂样品需使用吐温 20-PBS 缓冲溶液（货号： PBS-004）。

五、产品参数：

交叉反应率

六、需要但未提供的材料：

设备： HPLC、泵流操作架、高速均质器、高速粉碎机、单道微量移液器；

器皿耗材： 量筒、漏斗、收集瓶、容量瓶、玻璃纤维滤纸、离心管；

试剂： 色谱级甲醇、色谱级乙腈、蒸馏水、标准品。

七、试剂配制：

1、提取液：乙腈-水（9:1）

移取 900 mL 乙腈，加蒸馏水 100 mL 混合。

2、吐温 20-磷酸盐缓冲溶液（以下简称吐温 20-PBS）：

配制方式 1：使用普瑞邦吐温 20-PBS 试剂包（货号： PBS-004）进行配制；

配制方式 2：称取 8.00 g 氯化钠， 1.20 g 磷酸氢二钠， 0.20 g 磷酸二氢钾， 0.20 g 氯化钾，用 900 mL 蒸馏水溶解，然后用盐酸调节 pH 值至 7.4，加 5 mL 吐温 20，最后用蒸馏水稀释定容至 1000 mL。

八、样品处理：

毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。

（一）粮食及粮食制品

1、称样：准确称取 40 g（精确至 0.1 g）试样于均质杯中，加入 4 g 氯化钠；加入 100 mL 乙腈-水（9+1）溶液混匀；

   2、提取： 均质器高速搅拌提取 2 min，定量滤纸过滤；

3、稀释：取 10.0 mL 滤液，加水 40 mL，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取滤液备用（应调 pH 值至 6-8 之间） 。

（二）大豆、油菜籽、食用植物油

1、称样：  准确称取试样 40.0 g（精确到 0.1 g）（大豆需要磨细且粒度≤2mm）于均质杯中，加入 4.0 g 氯化钠和 100 mL 乙腈

   -水（9+1）溶液混合；

   2、提取： 均质器高速搅拌提取 1 min，定量滤纸过滤；

3、稀释：取 10.0 mL 滤液，加水 40 mL，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取滤液备用（应调 pH 值至 6-8 之间） 。

（三）啤酒、黄酒等酒类

1、称样： 取脱气酒类试样（含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏 30 min，过滤或超声脱气）或其他不含二氧化碳的酒类试样 20.0 g（精确到 0.1 g）于 50 mL 的容量瓶中，加乙腈定容至刻度线，摇匀。

2、稀释：取 10.0 mL 滤液，加水 40 mL，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取滤液备用；

（四）酱油、醋、酱及酱制品

1、称样：称取 25.0 g（精确到 0.1 g）混匀的试样，用乙腈定容至 100.0 mL，超声提取 2 min，定量滤纸过滤；

2、稀释：取 10.0 mL 滤液，加水 40 mL，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取滤液备用；

九、操作程序：

使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

1、连接：用 30 mL 注射器筒下端插穿免疫亲和柱上盖中间圆孔，使其连通；

2、上样：移取上述滤液 10 mL 至注射器筒内，打开下端堵头；

3、富集：将空气压力泵与注射器连接， 调节压力使样品提取液以 1-3 mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱， 建议重力过柱；

4、洗涤：依次用 10 mL  吐温 20-PBS 缓冲液和 10 mL 水加压清洗，弃去全部流出液，并使 2~3mL 空气通过柱体， 将免疫亲和柱内液体排干；

5、洗脱：在亲和柱中加入 2.0 mL 色谱级甲醇，通过重力过柱方式进行洗脱； 然后轻微加压排净洗脱液，收集全部洗脱液，涡旋混匀，以氮气吹至近干。用 1 mL 流动相溶解残渣，用有机相微孔滤膜过滤，  待上机检测。

十、注意事项

1、上柱液 pH 要在 6~8 之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH；

2、若样品浓度超出柱容量，需减少上柱量重新检测；

3、复杂基质必须使用吐温 20-PBS 缓冲液进行稀释后再进行过柱；

4、根据实际情况可以适当增减称样量， 同时提取液体积需按比例进行调整；

5、使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温；

6、免疫亲和柱需储存在 2-8℃条件下，不可冻存或常温保存；

7、玉米赤霉烯酮对人体有害，应做好安全防护措施；

8、使用过的玻璃容器及玉米赤霉烯酮溶液应以 10%次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。

十一、产品信息：

公司可提供的真菌毒素检测产品

：本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品